Tecnología de fondo
Cagrilintida es un nuevo análogo de amilina acilado de acción prolongada. Como agonista no selectivo del receptor de amilina (AMYR) y del receptor acoplado a proteína de calcitonina G (CTR), es un polipéptido cíclico compuesto por 38 aminoácidos. Su secuencia contiene 38 aminoácidos y un par de enlaces disulfuro. La cagrilintida puede reducir significativamente el peso corporal y la ingesta de alimentos, y tiene potencial en la investigación de la obesidad. La amilina es otra hormona relacionada con el hambre y la saciedad fuera de la vía de señalización del GLP-1.
La cagrilintida puede reducir la ingesta de energía, regular las elecciones y preferencias alimentarias, ejercer un efecto regulador de la glucosa al ser cosecretada con la insulina, inhibir la liberación posprandial de glucagón y retrasar el vaciamiento gástrico. Tiene ventajas obvias en el tratamiento de la diabetes, la obesidad, el síndrome metabólico, las enfermedades cardiovasculares y otros aspectos, y tiene una amplia demanda y perspectivas de aplicación.
Fórmula estructural química de cagrilintida
Información básica
InglésName：Cagrilintida
Número de empresa：GT-F064
CAS：1415456-99-3
Ssecuencia：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2 (puente disulfuro: cys4-cys9)
MmolecularFfórmula：C194H312N54O59S2
MmolecularPeso：4409.01
Materias primas utilizadas paraCagrilintida
Ruta Sintética
Diagrama de preparación de cagrilintida
(1)Preparación deCagrilintidaResina peptídica
Tome 1,5 mmol del primer aminoácido protegido y 1,5 mmol de HOBT, disuélvalos con una cantidad adecuada de DMF y enfríe a 0 ~ 15°C; tomar otros 1,5 mmol de DIC, agregarlo lentamente a la solución DMF del aminoácido protegido con agitación y agitar la reacción durante 10 minutos a 0 ~ 15 ° C para obtener una solución de aminoácido protegido activado, que se reserva.
Tomar 0,5 mmol de resina amino (grado de sustitución 0,42 mmol/g), hincharlo con solución de DMF durante 60 minutos, desprotegerlo con solución de Pip/DMF al 20% durante 30 min, lavar y filtrar para obtener la resina que va a reaccionar.
Agregue la solución del primer aminoácido protegido activado a la resina que va a reaccionar, lleve a cabo la reacción de acoplamiento a 25 ~ 35 ℃ durante 120 ~ 300 minutos, filtre y lave para obtener la resina que contiene 1 aminoácido protegido: Fmoc-Pro-Resin
Utilizando el mismo método anterior, acceda secuencialmente a los aminoácidos o fragmentos protegidos correspondientes del 2.º al 38.º mencionados anteriormente.:Fmoc- Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，Eicosanodioato de mono-terc-butilo, que produce 4,98 g de resina peptídica de carmegliptina.
(2)Preparación de crudoCagrilintida péptido lineal
Tome 4,49 g de resina peptídica de carfilzomib, agregue la solución mixta de TFA, la proporción de la solución mixta es TFA:EDT/Tis/fenol/H₂O = 87,5:2,5:5:2,5:2,5 y la dosis es de 8 ml por gramo de resina; agitar la reacción a 20~30°C durante 3 horas, filtrar la mezcla de reacción con un embudo de núcleo de arena, recoger el filtrado, lavar la resina con una pequeña cantidad de TFA 3 veces, combinar los filtrados, agregar MTBE para precipitación, lavar el precipitado con MTBE 3 veces y secar con bomba para obtener un polvo blanquecino, que son 2,08 g de péptido carfilzomib lineal crudo.
(3)Preparación de solución de péptido cíclico de cagrilintida cruda
Tomar 0,50 g de lineal bruto.Cpéptido de agrilintida, preparar una solución de péptido lineal crudo a una concentración de 5,0 mg/ml, agregar 5 ml de solución de DMSO gota a gota con agitación y reaccionar a 20 ~ 30 ℃ durante 20 h para obtener una solución de péptido de cagrilintida cíclica cruda.
(4)Preparación de refinadoCpéptido de agrilintida
toma el crudoCsolución de péptido cíclico de arraglitida y filtrarla con una membrana de filtro microporosa mixta de 0,45 μm；
Purificar y preparar mediante cromatografía líquida de alta resolución y recoger elCfracciones de arragliptina；
Se utilizó cromatografía líquida de alta resolución para el intercambio de tampón. Se recogió el pico principal después del intercambio de tampón y se detectó su pureza mediante cromatografía líquida analítica. Las soluciones de los picos principales después del intercambio de tampón se combinaron, se concentraron a presión reducida para obtener una solución acuosa de carbótido en ácido acético, que se liofilizó para obtener 152,18 mg de carbótido refinado con una pureza del 99,58 %, una impureza única máxima del 0,09 %, un rendimiento total del 31,87 % y un peso molecular de 4409,0.
HPLC diagrama
diagramaa de EM
Los ejemplos anteriores muestran que, en comparación con el proceso de síntesis por acoplamiento paso a paso, el producto obtenido mediante el método proporcionado por la presente invención tiene una pureza de más del 99,0 %, y cada impureza individual es inferior al 0,1 %, lo que mejora la calidad del producto y el rendimiento total. El proceso es simple y fácil de controlar, tiene un alto grado de industrialización y tiene un amplio valor práctico y perspectivas de aplicación.
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