5'-O-(4,4'-DiMetoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino)fosforamidita

La 5'-O-(4,4'-DiMetoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino)fosforamidita es el monómero estándar para introducir residuos de 5-metil-2'-desoxicitidina en ADN sintético y oligonucleótidos antisentido. El grupo N4-benzoilo protege la amina exocíclica de la base citosina, evitando reacciones de ramificación durante la síntesis en fase sólida. El grupo 5-metilo en el anillo de citosina aumenta la estabilidad térmica de los dúplex formados con ADN o ARN complementario (ΔTm ≈ +0,5–1,0 °C por modificación) y, lo que es más importante, reduce el potencial inmunoestimulador de los motivos CpG cuando se usan en vacunas antisentido o basadas en CpG. La 5'-O-(4,4'-DiMetoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino) fosforamidita es totalmente compatible con los ciclos de síntesis de ADN estándar (tiempo de acoplamiento de 2 a 3 minutos, activador como tetrazol o DCI) y condiciones de desprotección estándar (concentrado NH₃, 55°C, 8–16 h). La 5'-O-(4,4'-DiMetoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino)fosforamidita también es un intermediario clave en la síntesis de oligonucleótidos que contienen ácido nucleico bloqueado (LNA) cuando se combina con otros monómeros modificados. Esta fosforamidita se utiliza con frecuencia en la fabricación de fármacos antisentido aprobados por la FDA y en aplicaciones de investigación que exploran la regulación epigenética y el análisis de metilación del ADN.

Parámetros del producto

Garantía de calidad en Cosperpharm

Cada lote se somete a:

● Cromatografía de gases (GC): pureza ≥97,0%

● Valoración no acuosa: pureza ≥97,0%

● Índice de refracción – análisis confirmatorio

● ¹H NMR – verificación estructural

● Apariencia: líquido transparente de incoloro a amarillo claro a naranja claro

Cada envío viene acompañado de un COA completo, una MSDS (con información completa del GHS) y un certificado de origen.

Condiciones de almacenamiento

Guarde la 5'-O-(4,4'-DiMethoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino) fosforamidita en un recipiente herméticamente cerrado en una atmósfera inerte (nitrógeno o argón) a –20 °C para un almacenamiento a largo plazo. El almacenamiento a corto plazo (hasta 3 meses) a 2–8°C en condiciones de desecación puede ser aceptable, pero no se recomienda durante períodos prolongados. Mantener el recipiente seco, protegido de la luz y alejado de agentes oxidantes fuertes y ácidos. El compuesto es muy sensible a la humedad; abrir sólo en condiciones anhidras (guantera o con purga de argón). Después de abrir, devuelva el material no utilizado a –20°C inmediatamente bajo argón.

Vida útil: 2 a 3 años almacenado a –20 °C en un recipiente sellado, con purga inerte y desecante.

Precauciones de manipulación: Utilizar en campana extractora. Utilice guantes de nitrilo, gafas de seguridad y bata de laboratorio. Evite generar polvo. Lávese las manos después de la manipulación. Consulte la SDS para obtener información de seguridad completa.

Ventajas del producto

1. 5-Metilcitosina para mejorar la estabilidad dúplex y la resistencia a las nucleasas

El grupo 5-metilo en la base de citosina aumenta la temperatura de fusión (Tm) de los dúplex de ADN/ADN y de ADN/ARN en aproximadamente 0,5 a 1,0 °C por modificación. Esta estabilización térmica es particularmente valiosa en oligonucleótidos antisentido, donde una mayor afinidad de unión se traduce en una potencia mejorada y una dosis requerida reducida. El grupo metilo también confiere una mayor resistencia a determinadas nucleasas.

2. Inmunoestimulación reducida de motivos CpG

Los dinucleótidos CpG no metilados son reconocidos por el receptor tipo Toll 9 (TLR9) en las células inmunes humanas, lo que produce efectos inmunoestimulantes no deseados. La incorporación de 5-metilcitosina en motivos CpG (convirtiendo CpG en 5-meCpG) elimina el reconocimiento de TLR9, lo que reduce la liberación de citocinas no deseadas en aplicaciones antisentido y ARNip. La 5'-O-(4,4'-DiMethoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino)fosforamidita permite esta inmunomodulación crítica.

3. Compatibilidad total con la síntesis y desprotección de ADN estándar

La fosforamidita de 5'-O-(4,4'-DiMetoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino) utiliza el mismo esquema de grupo protector que la fosforamidita de 2′-desoxicitidina estándar (DMT en 5', Bz en N4, CE en 3'), con el único la diferencia es el sustituyente 5-metilo. Por lo tanto, no se requieren cambios en los ciclos de síntesis, las soluciones activadoras ni las condiciones de desprotección: funciona a la perfección en todos los sintetizadores de ADN estándar.

4. Esencial para los estudios de metilación de islas CpG

En la investigación epigenética, los oligonucleótidos con patrones definidos de 5-metilcitosina se utilizan como sustratos para metiltransferasas, como estándares para la secuenciación con bisulfito y como sondas para proteínas de unión a metilo. La fosforamidita de 5'-O-(4,4'-DiMethoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino) permite a los investigadores sintetizar secuencias de ADN metiladas personalizadas sin metilación enzimática, lo que a menudo produce patrones incompletos o heterogéneos.

5. Terapéutica de oligonucleótidos antisentido

Varios fármacos antisentido aprobados por la FDA (p. ej., nusinersen, inotersen) incorporan residuos de 5-metilcitosina para mejorar la estabilidad y reducir la inmunogenicidad. La 5'-O-(4,4'-DiMetoxitritil)-N4-benzoil-2'-desoxi-5-metilcitidina-3'-O-(O-2-cianoetil-N,N-diisopropilamino)fosforamidita es el monómero elegido para fabricar dichos productos terapéuticos a escala comercial.

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